蓝耳病（PRRS）作为困扰我国养猪业的“头号杀手”，其持续的病毒循环和频繁的免疫抑制给猪场带来了巨大的经济损失和生物安全压力。
如何精准、高效地监测猪群中的病毒动态，尤其是判断母猪场是否“稳定”或“转阳”，是每一位猪场兽医和管理者面临的核心挑战。
传统的血清学和唾液学监测各有其优缺点，而近年来，“死猪舌尖”作为一种新兴的、便捷的样本类型，因其能够靶向最可能带毒的死亡个体（包括死产、木乃伊胎），且采集过程无须操作活猪，受到了越来越多的关注。
然而，便捷不等于随意。一份样本从猪场采集到实验室检测，中间的每一个环节——如何处理、是否混合、如何保存运输——都可能严重影响最终结果的准确性，进而误导我们的生产决策。
近期，明尼苏达大学的一项研究就系统地评估了不同处理和检测策略对舌尖样本PRRSV检测结果的影响。
在实验室检测中，处理舌尖样本通常有两种方式。
一种是“舌尖液”（Tongue Tip Fluid, TTF），即通过按摩或离心等方式，收集舌尖组织渗出的液体（主要包含唾液、血液和组织液）。
另一种是“组织匀浆”（Tongue Tissue Homogenate, TTH），即将舌尖组织剪碎并研磨成匀浆。
研究结果给出了明确的答案。通过对5个猪场、100份舌尖样本的平行对比测试，研究人员发现，无论是单独检测还是混合检测，使用“舌尖液”（TTF）的检测灵敏度都显著高于“组织匀浆”（TTH）。
具体体现在两个方面：
1. 更高的阳性检出率
在个体检测中，一个阳性率较高的猪场（5号场），TTF检测出了全部20个阳性样本（100%），而TTH仅检测出9个（45%）。
在另一个猪场（2号场），TTF的阳性检出率也达到了45%，而TTH仅为15%。
这意味着，使用TTH有极大概率造成阳性样本的漏检。
2. 更低的Ct值
研究数据显示，在所有检测策略下，TTF样本的平均Ct值都显著低于TTH样本。
对于RT-PCR检测而言，Ct值越低，代表样本中的病毒核酸浓度越高。
这意味着TTF能更有效地富集病毒颗粒，从而提供更“强”的阳性信号，减少结果处于“临界值”或“可疑”状态的概率。
这可能是因为病毒更多存在于唾液和血液中，而组织匀浆过程引入了更多的细胞和细胞外成分，可能稀释了病毒或引入了PCR抑制物。
这一发现对于猪场实践的直接意义是，当我们将舌尖样本送往诊断实验室时，应明确告知或建议实验室优先采用提取“舌尖液”（TTF）的方式进行检测，以最大限度地提高病毒检出的可能性。
混合送检虽省成本，但可能牺牲检测精准度
为了降低检测成本，混合送检是猪场常用的策略。
该研究也对比了不同混合规模（5合1、20合1）对检测结果的影响。
结果警示我们，成本的节省是以牺牲准确性为代价的。
研究发现，与个体检测相比，TTF按5合1的混合检测出现了假阴性结果，其与金标准（个体检测）的符合率仅为85%。
这意味着，即便一个混合池中存在阳性样本，最终结果也可能显示为阴性，导致病毒的“隐形”传播。
这种稀释效应在20合1的混合池中可能更为严重（降至75%）。
当然，这并非完全否定混合送检的价值。
对于常规的、低成本的广谱筛查，混合送检仍不失为一种策略。
但对于以下关键场景，我们必须慎重考虑其风险：
评估母猪场PRRSV稳定性时：此时的目标是证明“没有病毒”，任何一个漏检都可能导致对猪场状态的误判，从而过早引入后备母猪，引发新一轮疫情。
净化根除的关键阶段：在净化后期，猪群中的病毒载量和排毒率可能已经很低，混合送检极易因稀释效应而漏掉最后的“残存火力”。
发生不明原因生产异常，需要精准诊断时。
因此，兽医和管理者需要根据监测目的的严肃性和风险等级，来权衡成本与准确性，做出最合适的送检决策。
时间和温度是关键，冷藏样本每延迟一天Ct值平均升高0.2
PRRSV是一种RNA病毒，其核酸链在体外环境中相对脆弱，容易降解。
这份样本从猪场到实验室的“旅程”是否稳妥，直接决定了检测的成败。
研究模拟了不同的运输和储存条件，结果令人警醒。
研究对比了冷冻（-18℃）与冷藏（4℃）样本，以及冷藏样本在采集后第1天、第4天和第7天进行检测的结果差异。
数据显示：
冷冻样本的Ct值始终低于冷藏样本，表明冷冻能更好地保护病毒RNA的完整性。
冷藏样本的Ct值随着时间的推移呈现明显的上升趋势。
模型分析揭示了一个明显的风险趋势：样本在4℃条件下每多存放一天，其Ct值估计平均升高0.2。
Ct值升高0.2看似微不足道，但累积效应是巨大的。
一个原本Ct值为36的弱阳性样本，在冰箱里放上几天再送检，其Ct值可能就会升高到37以上，从而被判定为阴性。
这意味着，运输的延迟、冰排的不足，都可能直接导致一个阳性猪场被误判为阴性。
这项研究为我们提供了具体的量化数据，强调了样本采集后应立即冷冻或在充足冷源下冷藏，并以最快速度送达实验室的重要性。
学习心得
1. 优先选择“舌尖液”检测
提交舌尖样本时，应优先选择“舌尖液”（TTF）进行检测，而非“组织匀浆”（TTH）。
这一简单的选择可以显著提升病毒检出率和结果的可靠性，避免因方法不当导致的漏检。
2. 关键场景慎用混合送检
混合送检会降低诊断敏感性，尤其是在病毒载量较低的情况下。
在评估猪场PRRSV稳定性、执行净化方案或进行精准病原诊断等关键时刻，应优先考虑个体检测，避免因节省小额检测费而做出错误的重大决策。
3. 严控样本储存与运输条件
时间和温度是RNA病毒检测的“生命线”。
舌尖样本采集后应立即置于4℃冷藏或-20℃以下冷冻，并尽快送检。
研究证实，冷藏样本每延迟一天，Ct值平均升高0.2，这足以让一个弱阳性样本变成阴性。
4. 科学运用死猪舌尖监测工具
死猪舌尖是一种高效的补充监测工具，但其价值取决于科学规范的操作。
正确地运用舌尖采样（选择舌尖液、合理混样、及时冷链运输），能有效捕获到猪群中因病死亡的高病毒载量个体信息，为猪场蓝耳病防控提供宝贵的数据支持。
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