猪场非瘟检测的确诊依据及操作流程

　　在猪场进行非洲猪瘟（简称非瘟）检测时，确诊的判断主要依赖于核酸检测结果。核酸检测是通过查找动物体内是否存在外来病毒的核酸来确定是否被感染。无论是人的新冠病毒检测还是猪的非瘟病毒检测，其原理都是相同的。一旦检测结果显示为核酸“阳性”，即可证明动物体内存在病毒。所有生物除朊病毒外都含有核酸，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。新型冠状病毒是一种仅含RNA的病毒，而非瘟病毒则是一种双链DNA病毒。
　　检测非瘟病毒最常用的方法是荧光定量PCR（qPCR）。qPCR反应体系中，荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值），该值与病毒核酸浓度有关。病毒核酸浓度越高，Ct值越小。样本来源广泛，包括活猪的血液、扁桃体液等液体样品，病死猪的脾、肺、肾、淋巴结、肌肉等组织样品，以及周边环境如饲料、车辆、粪便、污水、栏舍等。采集样本时应注意穿戴个人生物安全防护装备，并实施现场消毒和废弃物处理。
　　在进行病毒核酸提取前，一般情况下血液、扁桃体液等液体样品不需要额外处理，可以直接使用病毒核酸提取试剂盒提取gDNA。对于耐抑制性能较强的qPCR试剂，也可以直接取液体样品进行下游qPCR实验。而组织样品在提取前需要进行研磨裂解处理。qPCR检测步骤包括配制qPCR反应体系和加样上机检测。每次检测试验都需要设立阳性对照和阴性对照组，具体操作可参照所用qPCR试剂盒说明书。
　　结果分析是根据不同企业的产品性能来确定阳性的判断值。质控标准如下：1）阴性对照的Ct值应≥38或无Ct值；2）阳性对照的Ct值应≤35，并出现典型的扩增曲线。若阴性和阳性对照不满足以上条件，则此次实验视为无效。样品结果判定如下：1）阴性：检测样品的Ct值≥38或无Ct值，表明样品为阴性；2）阳性：检测样品的Ct值≤35，且出现典型的扩增曲线，表示样品为阳性；3）可疑：检测样品的35≤Ct值≤38，且出现典型的扩增曲线，应重检，重检仍出现上述结果的判为阳性，否则判为阴性。


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