盖塔病毒(Getah virus,GETV)于1995年在马来西亚首次从库蚊中分离出来,此后在澳大利亚、中国以及亚洲和欧洲的许多其他国家都发现了该病毒。GETV的地理分布广泛,宿主范围也较广,在自然界中的传播以蚊虫叮咬为主要传播途径,可感染猴子、猪、马等哺乳动物和鸟类。猪和马是GETV扩增和传播的重要宿主,另外在牛和人类体内检测到了GETV中和抗体。2017年,中国的猪群中暴发了盖塔病毒感染,在此次疫情中,超过150头妊娠母猪出现死胎或胎儿木乃伊化现象。甲病毒(Alphaviruses)持续威胁着公共卫生,而GETV作为一种重新出现的甲病毒,对人和动物构成了严重的威胁。
1 病原特点
GETV属于披膜病毒科(Togaviridae)Alphavirus,是该属中具有人畜共患传播潜力的成员之一。基因组类型为单股正链RNA病毒,直径为60~70 nm;病毒形态为球状,有囊膜。在GETV的结构蛋白(E1、E2、E3、6K 和 Cap)中,E1蛋白通过融合结构域介导病毒与宿主细胞膜融合;E2蛋白作为主要抗原蛋白,在病毒吸附、感染及诱导宿主免疫应答中发挥核心作用,还能诱导宿主产生针对盖塔病毒感染的免疫保护;6K蛋白则参与糖蛋白成熟与刺突组装,并调控宿主膜通透性;另外,E1-E2-E3可形成三聚体刺突结构,调控膜融合过程。目前,由于E2的免疫优势,已成为开发新型干预策略的重要突破口。
2 流行特点
GETV可感染包括马、猪、牛、鸡、鸭等多种家畜动物、啮齿动物以及野生动物和人,猪是自然界中GETV的主要扩增宿主。蚊类为GETV的传播媒介,刺扰伊蚊被认为是GETV最重要的传播媒介,其次是三带喙库蚊,鉴于此,蚊虫活跃的地区和季节该病毒的传播较为严重。GETV广泛分布于欧洲、亚洲和大洋洲,2017年首次在我国猪群中确诊感染,根据最新血清样本监测数据显示,山东、河北、浙江、江苏、广东、江西、福建、新疆都出现较高的检出率,而江西省猪场层面的阳性率甚至高达95.7%。
3 临床症状和病理变化
3.1 临床症状
GETV感染对妊娠母猪的危害尤为突出,可导致严重的繁殖障碍,尤其是在妊娠中晚期,常发生集中性或批次性的流产,造成死胎、木乃伊、弱仔或畸形胎等;新生仔猪感染后的死亡率极高,部分猪场疫情中可见整窝仔猪死亡,多表现为发热,体温可升高至40~41℃,精神萎靡,食欲减退甚至废绝。主要症状为关节炎型和神经症状型,表现为站立不稳、共济失调、转圈等,而有些仔猪还会出现黄褐色或水样腹泻;成年猪感染后症状相对较轻,多呈隐性感染。需要注意的是,猪盖塔病毒病的临床症状与其他一些猪病,如猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病等存在相似之处,仅通过临床症状难以准确区分,因此必须结合其他诊断方法进一步确诊。
3.2 病理变化
母猪胎盘轻度水肿、绒毛血管充血,有时出现微出血;仔猪神经元变性、轴突肿胀、胶质结节;肺部有肺泡上皮细胞脱落、肺泡壁增厚等现象;肾皮质增厚或出现梗死区;出血性脾炎,以及全身多组织器官广泛受损。
4 诊断方法
4.1 血清学诊断
血清学诊断方法依赖于抗原抗体之间的特异性结合,此类方法一直是实验室诊断中高效且准确的检测手段。目前正在开发和应用于猪盖塔病毒病的血清学检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、血凝抑制实验(HI)、间接免疫荧光试验(IFA)等。ELISA诊断方法的建立和应用较多,该方法是利用抗原抗体特异性的结合,对免疫反应进行定性和定量检测方法。目前有不少学者围绕Cap和E2两种结构蛋白开展ELISA诊断试剂盒的开发和优化。该方法灵敏度高,耗费时间短,可适用于大规模的血清学调查,但目前标准化的、可广泛应用于现场的ELISA诊断试剂盒仍然是一个亟待填补的空白。HI检测方法尽管具有快速、简便、对仪器和技术没有特殊要求的特点,但目前还处于开发和研究阶段,商品化应用仍需等待。IFA检测方法虽特异性强,试验速率快,灵敏度高。但用时较长,成本高,且需使用荧光显微镜观察结果,不便于大规模检测。
4.2 分子生物学诊断方法
基于病毒核酸的检测原理,分子生物学检测成为判定病毒存在与否的关键途径。现常用逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)等技术对病毒核酸进行检测。尤其是RT-qPCR检测方法在GETV检测中展现出显著优势,首先体现在极高的灵敏度:相关研究证实,其检测体系最低检出量可低至10拷贝/μL,是普通RT-PCR方法的1 000倍;可在感染早期、病毒载量较低时实现有效检出。其次是优异的特异性:通过精心设计引物和探针,该方法能精准识别 GETV,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪场常见病毒均无交叉反应,保障检测结果准确。此外,其重复性与稳定性表现突出,已发表研究及商业试剂盒信息均表明,该方法批内、批间重复性良好,变异系数通常较低,确保了检测结果的稳定可靠。
5 防治措施
在缺乏有效疫苗的背景下,猪盖塔病毒病的防控核心在于“预防为主,综合防控”,其两大基石是严格的生物安全管理和彻底的蚊媒控制。
5.1 蚊媒控制
猪场防蚊需多措施协同:首先通过环境治理与孳生地清除,实施“三灭一防”策略,定期清理内外杂草、垃圾及积水容器,填平洼地、畅通排水,从源头消除蚊虫孳生地。其次搭建物理屏障,在猪舍门、窗、通风口安装防蚊纱窗,夜间蚊虫活跃时确保猪舍密闭,阻止蚊虫进入。夏秋季蚊虫高峰季,可采取化学控制,在环境、绿化带、排水沟喷洒菊酯类等高效低毒杀虫剂杀灭成蚊,同时向积水投放灭幼剂控制蚊卵幼虫。还可通过生物控制,在适宜水体饲养食蚊鱼等天敌,作为化学控制的补充。
5.2 强化养殖场生物安全体系
猪场GETV防控需按“人员-物资-引种-环境-应急”多环节严格管理:人员方面,限制非生产人员进生产区,工作人员分区管理、进区前淋浴更衣,疫区返场人员需隔离观察。车辆与物资需建立转运制度,进场车辆经洗消中心消毒,外来物资通过中转站或熏蒸消毒后入场。引种坚持自繁自养,确需引种需从无疫情猪场引进,隔离观察检测至少30 d。环境实行“全进全出”,每批猪出栏后彻底消毒,定期对场区道路、设施消毒。若出现流产或死胎,需立即密封消毒流产物等污染物,并按规定无害化处理。
6 小结
总体来看,我国猪盖塔病毒病流行日趋严峻,对养猪业造成了不可忽视的威胁。当前,有效的商品化疫苗和高效精准的诊断方法对该病的防治工作至关重要。另外,养殖场应加强对该病的认识,建立健全的生物安全体系,有效降低该病的发生和传播风险,从而保障生猪养殖的的健康发展。
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