猪肺炎支原体(MHP)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,也是猪呼吸道综合征(PRDC)的主要病原之一,该病病原主要通过定值于气管、支气管、细支气管黏膜表面,破坏表面纤毛,影响呼吸道清除功能和免疫功能,从而导致猪只生长缓慢,饲料转化效率下降,成活率降低,在土猪上面,上述影响更为明显。在当前养猪产业行情大降的情况下,养猪成本的控制显得尤为重要,而肺炎支原体作为慢性经济消耗性疾病,如何成功控制猪肺炎支原体对于成本控制意义重大。
1 资料与方法
1.1 猪场选择
选择8个猪场,其中黑猪场3个,总规模14 500头母猪,其中白猪场5个,总规模15 500头母猪,总样品份数358份鼻拭子。
1.2 鼻拭子采样方法
参照冯志新等方法,使用医用棉签(棉棒长度15 cm,小头)与猪鼻中隔呈45°角轻轻插入,遇到鼻中隔后稍作拐弯,绕过骨状瓣膜,与鼻中隔平行方向插入约2 cm,轻轻转动棉签,刺激采样猪喷嚏反射,当打2~3个喷嚏后,轻轻拔出棉签,放入离心管中,折断多余部分棉棒,密闭离心管,标号后于4℃保存(长途运输冷冻后再邮寄)。
1.3 仪器和试剂
猪肺炎支原体sIgA黏膜抗体检测试剂盒和猪肺炎支原体qPCR检测试剂盒均由江苏省农业科学院兽医研究所提供。
1.4 方法
1.4.1 MHP核酸检测方法
参照猪肺炎支原体荧光PCR检测试剂盒操作流程进行荧光PCR反应。反应体系20 μL: PCR反应液13μL,引物2 μL,待检DNA 溶液5μL。PCR反应程序:95℃预变性3 min;95℃ 10 s,60℃30 s,进行40个循坏。Ct值≤38的样本判定为阳性。
1.4.2 MHP黏膜SIgA检测方法
参照Feng等建立的猪肺炎支原体sIgA检测方法,用猪肺炎支原体sIgA-ELISA抗体检测试剂盒,检测鼻拭子样品上清液中的Mhp特异性sIgA抗体。在酶标仪上读取OD450 nm值。
2 结果
在所检测的358份鼻拭子中,含母猪样品95份,SIgA阳性62份,核酸阳性15份;60日龄保育猪样品98份,SIgA阳性34份,核酸阳性29份;120日龄育肥猪样品165份,SIgA阳性103份,核酸阳性87份。
在合计检测358份鼻拭子中,其中白猪母猪35份,SIgA阳性5份,核酸阳性1份,白猪保育猪20份,SIgA阳性20份,核酸阳性8份,白猪育肥猪70份,SIgA阳性58份,核酸阳性21份,黑猪母猪60份,SIgA阳性57份,核酸阳性14份,黑猪保育猪78份,SIgA阳性14份,核酸阳性21份,黑猪育肥猪95份,SIgA阳性45份,核酸阳性66份。
在白猪的125份鼻拭子中,其中免疫支必宁猪场中,母猪鼻拭子20份,SIgA阳性4份,核酸阳性0份,育肥猪鼻拭子40份,SIgA阳性32份,核酸阳性8份。在未免疫支必宁的猪场中,母猪鼻拭子15份,SIgA阳性1份,核酸阳性1份。保育猪鼻拭子20份,SIgA阳性20份,核酸阳性8份。育肥猪鼻拭子30份,SIgA阳性26份,核酸阳性13份。
免疫前后检测数据对比。某场免疫前育肥猪鼻拭子12份,SIgA阳性12份,核酸阳性10份,免疫后一年,采样母猪鼻拭子20份,SIgA阳性4份,核酸阳性0份,育肥猪鼻拭子20份,SIgA阳性12份,核酸阳性4份。
3 分析与讨论
猪肺炎支原体是对养猪业成本影响的前四大病之一,该病免疫保护的形成主要靠细胞免疫和黏膜免疫,体液免疫和免疫保护相关性不大。目前,市场上针对支原体的检测是血清IgG,对于灭活苗使用猪场,该指标能间接反应猪群的感染状态,却不能反应猪群的免疫保护状态。黏膜免疫以SIgA抗体为主,江苏省农科院兽医所支原体团队开发出了SIgA的检测方法,间接解决了免疫效果评价的难题。即如果猪群免疫保护效果好或肺炎支原体感染压力小,在育肥阶段SIgA和核酸的检出率大大下降,甚至为0。
本研究检测了8个猪场29 000头母猪的358份鼻拭子,从多个维度比较了目前支原体的感染状态,免疫状态。总体而言,支原体的感染率比较普遍,猪场检出率100%,猪群检出率SIgA为54.3%,核酸检出率为35.9%,这与江苏省农科院发布的2024年猪肺炎支原体流调报告比较符合。其中母猪检出率分别是65.4%,15.8%,保育检出率分别是34.7%,29.6%,育肥检出率分别是62.4%,52.7%,说明育肥是各阶段猪群中检出率和感染率最高的阶段,而保育仔猪检出率稍低。
在不同品种猪只检出率的比较中,白猪母猪SIgA为14.3%,核酸为2.9%,白猪保育分别是80%,40%,育肥分别是82.9%,30%。黑猪母猪SIgA为95.0%,核酸为23.3%,保育猪分别是16.9%,26.9%,育肥分别是47.4%,69.5%。黑猪母猪阶段和育肥阶段感染率远超白猪,说明支原体的感染在地方品种猪上更为明显。
在白猪品种中,笔者比较了免疫支必宁和不免疫支必宁的数据差别,结果显示,免疫过支必宁的猪场母猪阶段SIgA为20%,核酸为0%,育肥阶段SIgA为80%,核酸为20%。未免疫过支必宁的猪场母猪阶段SIgA为6.7%,核酸为6.7%,育肥阶段SIgA为86.7%,核酸为43.3%,免疫场感染率显著低于未免疫猪场。支必宁是江苏省农科院兽医研究所三代科学家连续50多年的科研结晶,疫苗种毒选择“168”毒株,从2007年获得国家新兽药证书以来,累计市场使用量2亿多头份,得到市场上普遍良好的反馈,支必宁主要特点是靶向免疫,早期占位,活苗能产生细胞免疫,黏膜免疫,在产生保护速度、保护率、保护时长、投资回报率上面均优于国内外灭活苗和国内其他品牌活苗。
在评估猪场里面,有一个猪场2022年未使用过支必宁,2024年开始使用支必宁,使用前的2022年育肥猪SIgA为100%,核酸83.3%,保肥成活率92.5%,100 kg体重日龄160 d,咳嗽比例30%,使用后的母猪SIgA为20%,核酸为0%,育肥猪SIgA为60%,核酸为20%,保肥猪成活率96.5%,100 kg体重日龄150 d,咳嗽比例低于5%。说明支必宁能够很好地控制猪支原体肺炎,改善了生产成绩。MHP-SIgA和核酸检测数据与生产数据也有着良好的对应关系。
猪肺炎支原体是影响养猪业成本的四大疾病之一,控制好猪肺炎支原体对于降低成本意义重大,行业内很多企业和科研院所对该病的防控进行了研究,虽然目前国内市场仍有很大部分是灭活苗,但是活苗从机理和实际应用优于灭活苗已经逐渐被认知,对于严重的猪场活苗+灭活苗的方式在效果上更优,同时配合敏感抗生素的使用,生产管理上的支持,控制猪支原体肺炎能够得到有效的控制。目前行业内提出猪肺炎支原体的净化,在净化的技术路线上,活苗更加可以发挥出更好的价值,并且在净化的评估上,兆丰华集团和江苏省农科院有针对性的有效的检测评估手段,也给支原体的净化评估提供了保障。
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