PRRSV阳性后备猪通过“LCHT+Rollover”实现蓝耳双阴净化

研究亮点

1. 方案完整详细：该研究包含了从目标场PRRSV净化能力评估到达到等级4（净化）所实施的所有细节和方案。

2. PRRSV感染动力学：断奶猪在自然感染的情况下从全群阴性到完全转阳所需周数，为疫苗最高效益比的介入点提供了数据基础。

3. 后备PRRSV驯化所需最小冷静期：研究包括了群体从均一化感染到全群口水液转阴性所需周数，为阳性后备猪用本场PRRSV驯化所需冷静期提供了数据基础。

4. 野毒感染方案：研究提供了PRRSV野毒感染所需的详细数据和步骤，包括感染时间、感染剂量、感染途径、稀释液配置等。

5. 本研究TTS（Time to Stable）：8个月。

6. 本研究实现完全净化（双阴）时间：8+13=21个月。

一、研究目的

评估将“引入 - 封闭 - 同质化”（LCH）、“检测 - 清除”（T&R）和 “轮换” （Rollover）策略相结合，利用 PRRSV 阳性断奶后备母猪净化PRRSV的效果；为需保留基因且计划重建 “分娩 – 出栏” 群的 PRRSV 阴性猪场，提供兼顾育种基因保留与PRRSV净化的可行方案。

二、研究方法

（一）基础信息与净化路线、时间线

（二）关键阶段操作

1. 净化前评估：评估 JS场 引入 PRRSV 的风险因素，包括用谷歌地图和实地考察分析周边 3km 内猪场数量、状态、与道路村庄距离、地形；收集 2021 年当地气象数据（气温、风速、雾霾天数量）。

2. 供应商猪场评估：对 SG场 和 FK 场进行 3 批连续监测，采集 PF（3-5 日龄，每 30-50 窝混样，3-6 份）、血清（21-25 日龄，5 份混样，30 份）、OF（42-46 日龄，6 份），评估 PRRSV 状态和毒株多样性；对 Ct 值 < 30 的阳性样本 ORF5 测序，构建系统发育树分析谱系和毒株数量。

3. 感染动态监测：将引入的 3 批后备母猪（断奶仔猪）分 5 个猪舍饲养，11-12 周龄转至育肥舍（9 个猪舍）；对 1、2 批母猪每 2 周监测 PRRSV 状态（OF 样本，每绳≤20 头猪，采集 20-30 分钟），直至所有栏 qPCR 阳性（多数感染），标记低 Ct 值栏用于 LVI 材料制备。

4. LVI 材料制备与同质化感染：筛选高病毒载量后备母猪， euthanasia 前采血，离心取血清，检测病原（仅 PRRSV 阳性，Ct=27.5，ORF5 测序与 SG场 及引入批次同谱系）；100 倍稀释血清（每 250mL 无菌生理盐水加 1g 头孢噻呋），10、13、16 周龄三个批次后备母猪同时肌肉注射 LVI；感染前 1 天全群用恩诺沙星，感染后 3 天用替米考星和四环素治疗2周。

5. 不同状态监测：

LVI 后12-24 小时采所有栏 OF 样本， qPCR 评估感染效率，每 4 周监测直至全栏阴性；4 周后采≥30 份血清 ELISA 评估感染率（>90%），每 3 周监测直至 T&R 结束；

监测 2 类状态（AASV标准）时，采 TTF（死胎，20-100 个舌尖 / 样，2 份）、PF（3-5 日龄，30-50 窝混样，7-8 份）、断奶仔猪血清（21-25 日龄，5 头混样，120-240 份）、围产期母猪血清（5 头混样，60 份），连续 4 次阴性则为 2 类状态；

监测 3-4 类状态时（AASV标准），选 120 头 8 周龄自繁后备母猪 ELISA（阳性率 < 3%），引入 30 头哨兵母猪，0、30、60 天 ELISA 均阴性为 3 类状态；8 月龄自繁后备母猪开始 T&R，断奶时血清 ELISA，阳性淘汰，用阴性母猪替换，7 批替换后，30、90 天各选 60 头母猪 ELISA 均阴性为 4 类状态。

6. 统计分析：用 GraphPad Prism 10 和 Excel 2023 计算均值、变异系数（CV）、阳性率；用 SPSS 26.0 进行 Fisher 精确检验（α=0.05），多重比较用 Bonferroni 校正（表 7α’≈0.00055，表 12α’=0.0024），按阳性率降序标注字母表示差异。

三、研究结果

（一）JS 场净化前评估结果

JS场 位于海拔约 200m 丘陵区，四周环山（北高南低），周边有高于猪舍的榕树；3km 内有 1 个 300 头规模的 PRRSV 阳性不稳定猪场（中间有 300m 海拔山丘）；距高速公路 1km，有 5-10m 宽绿化带，排气朝向公路；2022 年当地平均最高 / 最低温 27/16℃，平均风速 1 级（软风），年均 < 10℃仅 3 个月，无 < 4℃天气，无雾霾沙尘暴。

（二）SG场 和 FK场 的 PRRSV 状态与 ORF5 测序结果

1. 状态分类：SG场 和 FK 场均为 PRRSV 阳性不稳定 1 类状态，SG 场最后 1 批监测 PCR 阳性率 < 25%，毒株均为 8 谱系，多样性低；FK 场为不稳定高流行 1-A 类状态，毒株含 8 和 3 谱系。

2. 具体检测结果：FK场 20220514 批 PF 阳性率 0%、断奶血清 83%（5 谱系）、保育血清 100%（5 谱系）；20220612 批 PF 0%、断奶血清 58%（5 谱系）、保育血清 100%（3、8.7 谱系）；20220626 批 PF 0%、断奶血清 50%（8.7 谱系）、保育血清 100%（5 谱系）。

SG场 20220514 批 PF 0%、断奶血清 100%（8.7 谱系）、保育血清 100%（5 谱系）；20220612 批 PF 17%（测序失败）、断奶血清 25%（8.7 谱系）、保育血清 83%（5 谱系）；20220626 批 PF 0%、断奶血清 17%（8.7 谱系）、保育血清 100%（8.7 谱系）。最终选择从 SG 场单源引种。

（三）引入后备母猪的 PRRSV 感染动态

1. 第1 批（2022 年 8 月 17 日引入）：引入当天 OF 样本 PCR 阴性，2 周后 6 栏阳性（28.6%，6/21），11 周龄（引入后 8 周）全部栏位阳性。

2. 第2 批：引入当天 3 栏阳性（21.4%，3/14），7 周龄（引入后 4 周）全栏阳性。

（四）同质化感染与排毒评估

1. LVI 有效性：感染后 12-24 小时，所有栏 OF 样本 PCR 阳性；4 周后，369 份血清中 366 份 PRRSV N 蛋白抗体阳性（99%）。

2. 各批次阴性转化：第1 批LVI感染后 4 周仅 2 栏阳性，余 18 栏阴性；第2 批感染后 4 周 7 栏阳性，余 18 栏阴性；第3 批感染后 4 周 50% 栏阳性；LVI感染后 12 周，3 批所有 OF 样本均 PCR 阴性。

3. 抗体动态：LVI感染后4-72 周龄后，阳性率从 99%（4 周）逐步降至 3.3%（72 周），不同时间点阳性率存在显著差异。

（五）繁殖群 PRRSV 稳定状态达成

1. 等级2：第1 批开始分娩后，连续 4 批监测 TTF、PF、围产期母猪和断奶仔猪血清，均 PCR 阴性；4 批 8 周龄自繁后备母猪 ELISA，除 1 批阳性率 1.67%（1/120，均值 S/P=0.11）外，其余 3 批均阴性（均值 S/P 分别为 - 0.14、-0.12、0.03），确认达到 2 类状态。

2. 围产期母猪检测：7 批围产期母猪血清 PCR 均阴性。

（六）T&R 和轮换后达到等级4（实现净化）

1. 哨兵母猪检测：30 头哨兵阴性后备母猪引入前、引入后 30 天、60 天 ELISA 均阴性，均值 S/P 分别为 - 0.08、-0.08、-0.07，CV 分别为 0.11、0.07、0.11，达到 3 类状态。

2. 7 批断奶母猪检测：阳性率从 12.2%（1 批，11/90）降至 3.3%（7 批，4/122），平均S/P 值从 0.077 降至 - 0.013，期间剔除阳性母猪。

3. 等级4确认：7 批替换完成后 30 天、90 天，60 头母猪 ELISA检测 均阴性，均值 S/P 分别为 - 0.01、0.02，CV 分别为 0.14、0.04，达到 4 类状态；后续所有批次公母猪 ELISA 和 PCR 均阴性。

四、研究对 PRRSV 净化的借鉴意义

1. 先了解净化能力再实施PRRSV净化：不仅评估猪场地形、气候（如温和气候、低风速、无雾霾利于减少病毒传播）、周边猪场分布与状态，还需长期跟踪周边猪场活动、道路运输频率，量化净化后状态维持时长，降低病毒再引入风险。

2. 引源选择与引种策略：优先选择 PRRSV 毒株多样性低、阳性率稳定且较低的引种猪场；采用单源引种，避免多源引种增加毒株复杂性；引种时优先选择经产母猪（P2+）后代，其母源抗体更优，可降低早期感染率；引种前对供种场进行多批次（至少 3 批）监测，确保毒株一致性。

3. 同质化感染优化：选择 10-16 周龄后备母猪实施 LVI，平衡病毒排毒时间，猪只死亡率及母猪繁殖影响；LVI 前筛选与猪场流行毒株同谱系的高病毒载量个体制备材料，确保感染有效性；感染前后合理使用抗生素（如恩诺沙星、替米考星），降低继发感染导致的死亡率。

4. 监测方案细化：不同净化阶段采用针对性样本类型与检测频率——LVI 后短期（12-24 小时）用 OF 样本 qPCR 评估感染是否成功，ELISA检测确定感染率；每 4 周PCR监测猪群是否停止排毒；等级2监测需结合死胎 TTF、哺乳仔猪 PF、断奶仔猪与围产期母猪血清，连续多批（至少 4 批）阴性确认；3-4 类状态用 8 周龄自繁后备母猪 ELISA（阳性率 < 3%）和哨兵母猪监测（0、30、60 天均阴性），确保无病毒循环。

5. T&R 与轮换策略优化：采用 “断奶时检测 - 阳性淘汰 - 阴性保留” 的 T&R 模式，减少不必要的母猪淘汰，降低损失；按批次逐步轮换（如 7 批），而非全群一次性替换，保障生产连续性；若有自繁阴性猪场，可提前场外配种，待繁殖群达到等级2后引入怀孕阴性后备母猪，缩短生产恢复时间。

6. 饲养管理辅助：增加后备母猪饲养空间（0.44-0.5m²/ 头），禁止跨栏混养，减少病毒传播；对发热猪及时对症治疗，使用新针头注射，避免交叉感染；根据 PRRSV 感染动态（如自然感染需 4-8 周全群阳性），合理规划疫苗免疫时间（如 3-5 周龄免疫 MLV），计算免疫成本与收益，平衡净化效率与经济成本。

7. 毒株监测与测序：除 ORF5 测序外，增加全基因组测序，避免因 ORF5 相似但其他基因差异导致的毒株误判；净化过程中定期（如每批）测序，及时发现新引入毒株，调整净化方案。

8. 状态维持与生物安全：净化达到等级 4 后，仍需定期（如每 3 个月）随机抽样检测；加强车辆消毒（尤其是运猪车）、人员进出管理，设置物理隔离（如绿化带、高墙），安装空气过滤系统（尤其高风险区域），防止病毒再引入。