在养猪场,2 型猪圆环病毒(PCV2)一直是个难缠的疾病 —— 它会引起断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)等多种疾病,让生长猪群生长减慢、死亡率上升。疫苗是防控 PCV2 的核心手段,但选对疫苗、评准效果却没那么简单:母源抗体干扰、传统检测不准,常让猪场陷入 “打了疫苗却不知道有没有用” 的困境。

2025 年发表在《Porcine Health Management》上的一项研究,开发了一种全新的评估方法,终于破解了这个难题。

传统评估疫苗的 “老大难”:母源抗体太 “捣乱”

给仔猪打 PCV2 疫苗,通常选在 3-4 周龄,但这时仔猪体内往往还残留着从母猪那里获得的母源抗体(MDA)。传统上,我们靠 ELISA 检测抗体水平来判断疫苗效果,可 MDA 会 “冒充” 疫苗诱导的抗体,让结果大打折扣 ——不管疫苗好不好,抗体检测可能都显示 “差不多”,根本区分不出疫苗的真实效果。

更麻烦的是,PCV2 疫苗没法实现 “阻断性免疫”,就算打了疫苗,猪还是可能感染病毒和排毒。这时候,只看抗原、抗体水平就不够准确了。

1、新方法登场:盯紧 “记忆 B 细胞”,直接“洞穿”疫苗效果!

记忆 B 细胞是免疫系统的 “后备军”:当猪接触过 PCV2 抗原(比如疫苗),它会悄悄 “记住” 这个病毒。一旦再次遇到 PCV2,就会快速活化,变成浆细胞产生大量抗体,打退病毒。也就是说,记忆 B 细胞的数量,直接反映了疫苗是否真的激发了有效的免疫反应。

于是,本研究的科研团队开发了专门检测 “PCV2 特异性记忆 B 细胞” 的 ELISpot 方法(酶联免疫斑点法),并优化了关键条件:

  • 用 R848(一种免疫刺激剂)刺激免疫细胞 3 天,让记忆 B 细胞活跃起来;
  • 用 1.25μg/mL 的 PCV2 Cap 蛋白(病毒的关键结构蛋白)“捕捉” 特异性记忆 B 细胞;
  • 搭配 5μg/mL 的生物素标记抗体和 0.25μg/mL 的 HRP - 链霉亲和素,让检测信号更清晰。

2、实战 PK:新方法 VS 传统方法,结果太不一样

为了验证新方法,本研究选了 40 头 4 周龄、母源抗体水平高的仔猪,分成 四组:

  • 空白对照组:生理盐水;
  • 疫苗 A 组:亚单位疫苗(杆状病毒表达);
  • 疫苗 B 组:亚单位疫苗(另一家公司,杆状病毒表达);
  • 疫苗 C 组:灭活疫苗。

分别在接种前、接种后 14 天、28 天检测,试验设计如下:


(1)传统 ELISA 检测:白忙一场

所有组的 PCV2 抗体水平都在下降,母源抗体逐渐消失(图1),疫苗组和对照组几乎看不出差别。这说明,靠抗体评估完全不靠谱,母源抗体的干扰太严重。

图 1 不同 PCV2 疫苗免疫后不同阶段断奶仔猪的抗体水平。A:T01 组(注射生理盐水);B:T02 组(疫苗 A);C:T03 组(疫苗 B);D:T04 组(疫苗 C)。,p<0.001;,p<0.01;,p<0.05;ns,p≥0.05

(2)ELISpot 检测:一眼看穿疫苗好坏(图2)

  • 对照组的记忆 B 细胞数量几乎没变化;
  • 三个疫苗组的记忆 B 细胞都显著增加,14 天达到高峰;
  • 疫苗 A 诱导的记忆 B 细胞最多,疫苗 B 次之,疫苗 C 最少。

图2 不同 PCV2 疫苗免疫后不同时期断奶仔猪的记忆 B 细胞数量变化。A:T01 组(注射生理盐水);B:T02 组(疫苗 A);C:T03 组(疫苗 B);D:T04 组(疫苗 C);E:不同疫苗免疫后 0-28 天断奶仔猪的 ELISpot 检测结果。,p<0.001;,p<0.01;,p<0.05;ns,p≥0.05

  • (3)病毒感染结果:和记忆 B 细胞 “完美匹配”(表1)

用 qPCR 检测猪群是否感染 PCV2,发现:

  • 疫苗 A 和 B 组的感染率最低(11.1% 和 10%);
  • 疫苗 C 组和对照组感染率高达 44.4%。

显然,记忆 B 细胞越多,猪群抵抗 PCV2 感染的能力越强。

表1 不同免疫组免疫前后PCV2感染率及病毒血症

为什么记忆 B 细胞更靠谱?

不受母源抗体干扰:母源抗体是 “外来的”,而记忆 B 细胞是猪自己的免疫系统产生的,能直接反映疫苗是否激发了真正的免疫反应。

直接关联保护力:记忆 B 细胞是免疫记忆的核心,数量多意味着猪群 “记得牢、反应快”,遇到病毒时能快速反击,减少感染风险。

对养猪场的启示

  1. 选疫苗别只看抗体:在母源抗体高的仔猪中,ELISpot 检测记忆 B 细胞更能区分疫苗好坏,亚单位疫苗(A、B)表现优于灭活疫苗(C)。
  2. 评估时间有讲究:疫苗接种后 14 天左右,记忆 B 细胞水平达到高峰,这时候检测最能反映疫苗的免疫原性。
  3. 精准防控 PCVAD:通过监测记忆 B 细胞,能更早、更准确地判断疫苗是否有效,帮助猪场调整免疫方案,减少 PCV2 带来的损失。

总结

这项研究告诉我们:评估 PCV2 疫苗效果,别再被抗体水平 “忽悠” 了。ELISpot 检测 PCV2 特异性记忆 B 细胞,就像给猪场装了个 “免疫雷达”,能穿透母源抗体的干扰,精准锁定疫苗的真实效果。对于养猪人来说,这不仅是一种新方法,更是防控 PCVAD 的 “定心丸”—— 选对疫苗、用好疫苗,才能让猪群更健康!

参考文献:

Fan J, Fan F, Chen Z, Chen P, Zhu Y, Li X, Liu T, Li R, Dong W, Ge M. Evaluation of PCV2 vaccine immunogenicity and efficacy using ELISpot to detect virus-specific memory B cells. Porcine Health Manag. 2025 Jul 10;11(1):38.





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