江苏农牧科技职业学院卢会鹏，陈长春等：表达非洲猪瘟pp62与Hsp70蛋白重组腺病毒对小鼠的免疫原性

《畜牧兽医学报》2025年第56卷第6期刊登了江苏农牧科技职业学院陈长春, 吴植, 任冠宇, 陈文玉, 曹世诺, 朱睿, 张力, 成玉婷, 朱善元, 卢会鹏的文章——“表达非洲猪瘟pp62与Hsp70蛋白重组腺病毒对小鼠的免疫原性分析”，该文由江苏农牧科技职业学院自然科学基金储备项目(NSF2022CB22)；江苏省重点研发计划(现代农业)(BE2020407)；江苏农牧科技职业学院科技创新团队资助项目(NSF2023TC01)资助。该研究的创新点:1）构建了一种融合表达非洲猪瘟病毒（ASFV）pp62蛋白和分支结核杆菌热休克蛋白70（Hsp70）的重组腺病毒疫苗（rAd-CP530R-Hsp70），利用Hsp70作为分子佐剂增强免疫原性。2）验证了该重组腺病毒疫苗在小鼠模型中能够同时激活体液免疫和细胞免疫，显示出良好的免疫原性，为非洲猪瘟疫苗的研发提供了新的策略和数据支持。

研究背景与目的

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的一种急性、烈性传染病，对养猪业造成巨大损失。由于ASFV结构复杂且基因高度变异，疫苗研发面临巨大挑战。目前，灭活疫苗和亚单位疫苗无法提供有效保护，而减毒活疫苗存在毒力返强的风险。因此，开发一种安全、有效的ASF疫苗迫在眉睫。本研究旨在利用复制缺陷型腺病毒作为载体，构建融合表达ASFV的pp62蛋白和热休克蛋白70（Hsp70）的重组腺病毒疫苗，并评估其在小鼠中的免疫原性，为ASF疫苗的研发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料

ASFV HLJ2018 株 CP530R 基因经猪源密码子优化后合成；穿梭载体 pShuttle-CMV-Hsp70 及 pAdEasy-1 。

1.2 重组腺病毒的构建

用pAdEasy-1系统构建 pShuttle-CP530R-Hsp70；PmeⅠ线性化→BJ5183同源重组得 pAd-CP530R-Hsp70；PacⅠ线性化→转染HEK293A拯救重组腺病毒 rAd-CP530R-Hsp70。

1.3 重组腺病毒的验证 感染 HEK293A 后，利用 ASFV 阳性血清进行 Western blot（约90 ku）和间接免疫荧光，确认 pp62-Hsp70 融合蛋白正确表达。

1.4 小鼠免疫试验

^{6 周龄 BALB/c 雌鼠 30 只，随机分为 rAd-CP530R-Hsp70 组、rAd-Hsp70 组及 PBS 对照组，每组肌肉注射 10⁸ PFU，100 μL·只-1；第21 天加强一次。}

_{1.5 血清抗体检测 分别于免疫后 14、21、35 d 采血，间接 ELISA 测定抗 pp62 IgG（OD450 nm）。}

1.6 细胞因子检测 免疫后 35 d 分离脾细胞，用 pp62 重组蛋白刺激 72 h，ELISA 测 IL-2、IL-4、IFN-γ 水平。

2 结果2.1 重组腺病毒的构建与验证 pShuttle-CP530R-Hsp70 和 pAd-CP530R-Hsp70 构建正确；Western blot 与免疫荧光均显示 pp62-Hsp70 高效表达（图2）。

2.2 小鼠免疫反应

_{抗体：rAd-CP530R-Hsp70 组 OD450 nm 于 35 d 升至 1.33，显著高于对照（P<0.01）。细胞因子：该组脾细胞上清 IL-2、IFN-γ、IL-4 均显著升高，提示同时激活 Th1 与 Th2 型免疫（图3）。}

3 讨论

本研究利用重组腺病毒载体结合Hsp70分子佐剂开发的ASF疫苗在小鼠模型中显示出良好的免疫原性。重组腺病毒载体具有高转导效率、大容量基因携带能力和广泛的宿主细胞嗜性，能够同时激活体液免疫和细胞免疫。尽管在小鼠中取得了较好的免疫效果，但ASFV的免疫保护机制在不同宿主中可能存在差异，需要进一步在猪等目标宿主中进行验证。

4 结论

本研究构建的重组腺病毒疫苗能够有效诱导小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应，具有良好的免疫原性。该疫苗为非洲猪瘟疫苗的研发提供了理论基础，展示了腺病毒载体结合分子佐剂在疫苗开发中的潜力。

关键词：非洲猪瘟病毒 ; CP530R ; 重组腺病毒 ; Hsp

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