如何科学有效的采集猪群健康监测样品（二）

2 、口、鼻拭子及肛门拭子样品

2.1 适用对象

 限位栏母猪、公猪、发病或死亡的保育猪、育肥猪的无伤口单独采样，大猪使用大号棉签或者植绒拭子（长度15cm – 20cm），保育猪使用小号棉签或植绒拭子（长度8cm – 15cm）。

2.2采样材料（采样数量N）

 根据采样计划准备足量的合适规格棉签或植绒拭子（优先选用植绒拭子）、2ml EP管N只（小棉签）或10ml EP管N只（大棉签）、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套一副、一次性PE手套若干。

2.3 样品采集

 戴上一副乳胶手套，外面套上一层PE手套，取出干净的棉签准备采样，采集口、鼻、肛门拭子请勿将棉签沾湿，根据应激大小，按照肛门拭子、口腔拭子最后采集鼻拭子。

 口腔拭子：对于活猪，轻柔地靠近猪只后将棉签伸入猪的口腔，在牙龈和猪唇之间来回刮擦，收集唾液，要求棉签完全湿润为止；对于死猪，将棉签在死猪口腔内反复刮擦，覆盖整个口腔，棉签表面须可见脱落的粘膜。

 肛门拭子：对于活猪，采集肛门拭子时站在猪身后，尽量避免接触猪，在猪尾翘起时迅速找到肛门，轻柔的将拭子插入到肛门内约深入3~5cm，拭子要尽量的沿着直肠壁刮擦，尽可能采集到粪便和直肠粘膜；对于死猪则同样要求可见粪或粘膜。

 鼻拭子：采集活猪鼻拭子时轻柔靠近猪只，在其安静时将拭子对准鼻孔，角度向外、向下方成45度角方向迅速伸入猪鼻腔中，若鼻液较少则多采集几次。如果猪只过于敏感，则使用消毒后的锁口器保定后完成采样，小猪的鼻拭子可以由饲养员抱起小猪固定头部后采集。对于鼻液较少的死猪，按上述方向将拭子伸入鼻腔并刮取粘膜。

2.4 拭子样品收集

 拭子样品在采集后应立刻打开干净无菌的2ml EP管（或者10ml EP管），将拭子头部插入管中，折断棉签柄并立刻盖上管盖并标记，换外层PE手套后采集下一头猪，避免交叉污染。

2.5检测

 拭子样品需尽快低温送至实验室检测，检测前加入适量PBS（以能见管内有液体为准），使用震荡仪震荡5分钟，12000rpm/min离心5分钟后取上清提取核酸。