甘油保菌全流程

一、甘油保菌的作用机理：1、渗透压调节；2、抗氧化保护；3、提供能量和碳源。

二、实验步骤

1、实验准备工具准备与灭菌

准备镊子、EP管（离心管）、移液枪头等实验工具。为确保无菌操作环境，所有工具需通过高压灭菌锅进行严格灭菌处理，灭菌温度通常设定为121℃，持续15 - 20分钟。灭菌完成后，将工具放置于无菌操作台备用。

2、甘油保存液配制甘油保存液的制备

根据实验需求，将甘油稀释至适宜浓度（如50%）。具体操作为将等体积的甘油与蒸馏水混合，缓慢吸取甘油并逐滴加入蒸馏水中，同时轻轻搅拌，避免产生过多泡沫。最终制得的50%甘油水溶液需在无菌条件下保存，以备后续使用。

3、菌种培养菌种接种与培养

将需要保存的菌种接种至液体培养基中进行培养。对于一般细菌，可接种至普通肉汤培养基；对于链球菌属、奈瑟氏菌属等对环境要求较高的菌株，则需接种至其专用的培养基中。根据菌种特性，选择合适的培养条件（如温度、氧气环境等），确保菌种能够良好生长并达到适宜的生长浓度。

4、甘油保存液与菌液混合混合甘油保存液与菌液

待菌液培养至适当浓度后，按照一定比例（如1:1）将甘油保存液与菌液混合。混合时需充分摇匀或使用移液枪轻轻吹打，确保甘油与菌液均匀融合，使甘油能够均匀包裹菌体，为菌种提供保护。

5、分装与保存分装与标记

将混合好的甘油菌液分装至EP管中，每管分装适量菌液（如500μL或1mL）。在EP管上清晰标注菌种名称、保存日期、稀释比例等关键信息，以便后续使用和管理。

6、保存条件

将分装好的EP管放入超低温冰箱中保存，根据菌种特性选择合适的保存温度（如-20℃、-70℃或-80℃））。低温环境能够有效抑制细菌代谢，延长菌种的保存时间，确保菌种在长期保存过程中保持活性和稳定性。